【關鍵詞】子宮腺肌病;子宮內膜;誘生型一氧化氮合酶;免疫組織化學

子宮腺肌病是婦科常見病，以在子宮肌壁內出現子宮內膜腺體和間質為其病變征，此病多發生于30～50歲經產婦，臨床上往往以子宮增大、痛經和月經過多為其主要癥狀。近年來對該病的發生機制提出一些新的看法，關于血管生成、免疫等方面的異常在子宮腺肌病的發生發展中起重要作用。子宮內膜侵入子宮肌層后，血管生成活性的增強，為異位內膜的種植生成提供了有利條件。NO可誘導血管內皮細胞^①的分裂增生，調節血管生成及血流量，由此推測可在子宮腺肌的發生發展中發揮作用。所以本研究用免疫組化的方法，測定子宮腺肌病患者在位內膜與異位內膜誘導型一氧化氯合酶(iNOS)的含量，旨在探討其在子宮腺肌病的發生發展過程中所起的作用和意義，為臨床治療提供理論依據。

1、資料與方法

1.1 標本 來源材料均取本院2006年9月—2008年3月手術切除并有完整臨床資料的子宮標本，腺肌病組:子宮腺肌病38例，患者年齡35～49歲，平均年齡38.9歲;子宮內膜組織學分期:增生期20例，分泌期18例。肌瘤組:無癥狀子宮肌瘤31例，38～51歲，平均年齡43.2歲;子宮內膜組織學分期:增生期17例，分泌期14例兩組患者術前3個月內均未服用任何激素類藥物。所有病例均行子宮全切或次全切除術，并經病理診斷證實。即用型SABC免疫組織化學染色試劑盒(產品編號:SA1022)為武漢博士德生物工程有限公司產品。

1.2 方法 石蠟切片常規二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，PBS液洗5min,3%H2O25min,PBS洗5min;10%山羊血清室溫10min;一抗(1∶50)，冰箱4℃過夜，PBS洗5min;二抗(1∶150)37℃溫箱30min,PBS洗5min;SABC30min,PBS洗5min;DAB顯色5min,自來水沖洗;蘇木素復染，脫水透明，封片。

1.3 結果 判定結果判斷標準^②以細胞漿出現黃色顆粒為陽性，表達強度用組織學評分表示。組織學評分為ΣPi，其中i代表細胞漿染色強度，分為4級:0級無黃色顆粒，1級為淡黃色顆粒，2級為黃色顆粒，3級為棕色顆粒;P代表同一染色強度細胞所占計數細胞百分數，1、2、3、4、5分別代表染色細胞占計數細胞總數的0%～15%、16%～50%、51%～85%、86%～95%、96%～100%。每張切片隨機測定5個高倍鏡視野(200倍)的染色強度，取5個視野的組織學評分均值作為最終得分。

1.4 統計學處理 實驗結果用x±s表示，采用方差分析和兩兩比較t檢驗，P<0.05為有顯著性差異。

2、結果

iNOS在正?；虍愇粌饶は偕掀ざ加嘘栃员磉_，兩組的血管平滑肌也有陽性表達，而在間質細胞及子宮平滑肌細胞均未見陽性表達。

2.1 腺肌病組在位子宮內膜與肌瘤組子宮內膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期子宮內膜與肌瘤組比較，腺上皮iNOS組織學評分無明顯變化，兩組比較，差異無顯著性(P>0.05)。同時，兩組子宮內膜腺上皮的增殖期和分泌期iNOS組織學評分比較，差異無顯著性(P>0.05)，即無周期性變化，兩組患者正常內膜、異位內膜腺上皮細胞iNOS組織學評分比較注:*與肌瘤組正常內膜比較，P>0.05，▲與在位內膜比較，P<0.05，△與同組增殖期比較P>0.05

2.2 腺肌病組在位內膜與異位內膜iNOS組織學評分比較 腺肌病組增殖期或分泌期異位內膜腺上皮細胞iNOS組織學評分均較在位內膜顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。異位內膜、在位內膜及正常內膜各組內增殖期和分泌期比較均無明顯差別，即無周期性變化。兩者比較差異無顯著性(P>0.05)。

2.3 腺肌病組與肌瘤組血管平滑肌iNOS組織學評分比較 腺肌病組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(8.6±1.3)較肌瘤組血管平滑肌細胞iNOS組織學評分(3.5±1.4)顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。

3、討論

內源性NO是由一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)以L 精氨酸為底物，在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)存在下生成，催化該反應的NOS有兩種同工酶，即結構型NOS(constitutiveNOS,cNOS)和誘生型NOS(inducibleNOS,iNOS),前者合成的NO含量很小，主要參與人體的正常生理活動，主要存在與內皮細胞，神經原細胞，腎上腺皮質細胞和血小板等。機體內iNOS催化產生大量NO主要參與機體的病理生理過程，本研究結果顯示，腺肌病患者在位子宮內膜與子宮肌瘤患者子宮內膜iNOS的表達強度無明顯差異，均無周期性變化。腺肌病患者異位內膜iNOS的表達強度顯著高于其在位內膜。另外Schindl等^①研究發現在子宮腺肌病中，在位內膜微血管密度與正常內膜間無差異，而異位內膜則高于在位內膜和正常內膜，且在月經周期中無改變，與本研究結果一致，說明子宮內膜在侵入子宮肌層后，血管生成活性增強。

另外本研究結果顯示，在腺肌病組，血管平滑肌iNOS表達強度高于肌瘤組，表明NO還通過血管擴張作用，增加血流量，為異位內膜種植提供條件。子宮內膜異位種植后，由于生理特性的改變^③，可通過自分泌細胞因子誘導iNOS產生增強而調節NO的合成。楊丹等^④的實驗結果提示，雌激素與ER結合后，可能通過增加血管平滑肌細胞的iNOS的活性和蛋白的表達，促進其生成和釋放NO增加。另外，NO可誘導內皮細胞的分裂、增生，調節血管形成為異位內膜的形成創造條件。沒有NO，生長中的腫瘤大小會因血供缺乏而受到限制^⑤，也從另一方面提示了血管生成在腺肌病中的重要作用。總之，在腺肌病的發病過程中，異位內膜iNOS的高表達，致使NO合成量增加，血管擴張，并利于血管形成，增加血流量，為子宮內膜的異位種植和生長提供了有利條件。

【參考文獻】

[1] Schindl M,Birner P,Obermair A,et al.Increased microvessel density in adenomyosis uteril[J].Fertil Steri1,2001,75(1):131 135.

[2] 沈育紅,唐中國,喇端端.VEGF 165 在異位、在位和正常子宮內膜中的表達[J].中國微循環,2004,8(10):304 306.

[3] 汪玉寶,曹斌融,杜心谷.子宮內膜異位癥的研究近況[J].國外醫學婦產科學分冊,1995,24(1):88 91.

[4] 楊丹,付曉東,李永,等.誘導型一氧化氮合酶在17β 雌二醇誘導的血管平滑肌細胞周期阻滯中的作用[J].生理學報,2003,55(2):17 22.

[5] Ambs S,Bennet WP,Meriam WG,et al.Frequent nitric oxide synthase 2 expression in human colon adenomas:implication for tumor angiogenesis and colon cancer progression[J].Cancer Res,1998,58:334 341.